紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)含量測(cè)定方法-上海奧析UV1800PC

IgG含暈測(cè)定法

(紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)含量測(cè)定方法-上海奧析UV1800PC紫外-可見(jiàn)分光光度法）

本法系依據(jù)免疫球蛋白G (IgG) 與相應(yīng)的抗體特異

性結(jié)合后，在適宜的電解質(zhì)、溫度、p H 條件下，產(chǎn)生凝

集反應(yīng)，形成抗原-抗體復(fù)合物，根據(jù)供試品的吸光度求

出供試品中I g G的含量。

試劑 （1 )緩沖液稱取三羥甲基氨基甲烷（Tris)

12. 42 g ,氯化鈉9g、聚乙二醇6000 50g、牛血淸白蛋白

(BSA) lg、（NaN3) l g ,加水溶解，用l.Omol/L

鹽酸調(diào)p H 值至7. 4，加水稀釋至1000ml。

( 2 )抗人I g G血清按說(shuō)明書要求將凍干抗人IgG血

清復(fù)溶，按標(biāo)示效價(jià)取一定量抗人I g G血清，加緩沖液稀

釋至抗體zui終效價(jià)為1 : 4 (例如抗人I g G血清效價(jià)為1 ••

100，量取原液2 m l加抗體緩沖液48ml)，充分混勻，

0.45卩!11膜過(guò)濾。4°C保存?zhèn)溆谩?/span>

IgG標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備用將I g G標(biāo)

準(zhǔn)品在每l m l含0.2?6 . 0 m g范圍內(nèi)做適當(dāng)?shù)南盗邢♂?/span>

(通常做5個(gè)稀釋度）。

供試品溶液的制備用將供試品稀釋

成高、中、低3 個(gè)稀釋度，其I gG含量均應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范

圍內(nèi)。測(cè)定法取供試品溶液1(^1，加人已預(yù)熱至37°C的

抗體液l m l ,混勻，每個(gè)稀釋度做2 管，置37°C水浴中保

溫1小時(shí)，充分混勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則

0401)，在波長(zhǎng)3 4 0 n m處分別測(cè)定吸光度。

用I g G標(biāo)準(zhǔn)品溶液10M1替代供試品溶液，同法

操作。

計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和供試品不同稀釋度溶液的吸光度的均

值。以標(biāo)準(zhǔn)品溶液的I gG含量的對(duì)數(shù)對(duì)其相應(yīng)的吸光度的

對(duì)數(shù)作直線回歸，求得直線回歸方程，相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于

0.99；然后將供試品溶液吸光度的對(duì)數(shù)值代人直線回歸方

程，求得值的反對(duì)數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，求取每lml供試

品溶液I gG含量，再由供試品各稀釋度I g G含量求平均

值，即為供試品I gG含量（g/L) 。

【附注】（1 ) 全部反應(yīng)管必須在1 0分鐘內(nèi)測(cè)量完畢。

( 2 )設(shè)置紫外分光光度計(jì)狹縫寬度（Slit Width)

為 2 n m 0

( 3 )每次測(cè)定可根據(jù)供試品I gG含量，適當(dāng)調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)

品溶液中I gG含量范圍。